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雅酶 哺乳動物蛋白抽提試劑盒(您所在地區可能無法購買,詳情請咨詢:400-0588-030)

市場價:¥798.00

商城售價:798.00

所得積分:798

貨 號:PC302

品 牌:雅酶(EpiZyme)

包裝: 100次

單位:

供貨時間:現貨

數 量:
庫存9998件
  • 產品詳情

哺乳動物蛋白抽提試劑盒

Mammalian Protein Extraction Kit

本產品常溫運輸其中 蛋白酶抑制劑混合液 需冰袋運輸;保存于室溫其中 蛋白酶抑制劑混合液 保存于-20保質期12個月

 

貨號規格

PC302:  100

 

產品內容

組分名稱

體積

哺乳動物蛋白抽提試劑

100 ml

蛋白酶抑制劑混合液

1 ml


產品特點

溫和高效——使用溫和配方保證所提取蛋白保持生物學活性,快速有效提取細胞漿和細胞核蛋白;

避免降解——帶有蛋白酶抑制劑混合物,可有效避免蛋白提取過程中蛋白的降解。

 

產品簡介

本產品能夠快速、溫和、高效地裂解哺乳動物細胞,有效提取細胞漿和細胞核蛋白。該試劑使用溫和配方保證所提取蛋白保持生物學活性并可應用于多種蛋白分析試 驗,如報告基因和酶活性測定、免疫檢測、蛋白純化等。提取后蛋白可采用BCA法進 行蛋白定量分析。試劑盒中帶有蛋白酶抑制劑混合物,可有效避免蛋白提取過程中蛋 白的降解。

 

使用說明

1. 在蛋白抽提前,請將試劑盒中的 哺乳動物蛋白抽提試劑 預冷;

2. 樣本裂解

?  對于貼壁細胞

(1) 小心棄去培養基,用PBS漂洗細胞。

(2) 盡可能地棄去PBS(多余的液體將降低裂解液的濃度)。

(3) 加入適量 哺乳動物蛋白抽提試劑 在抽提蛋白前2~3 min按照1:100加入蛋白酶抑制劑混合液 ),在冰上用移液器吹打數下,使裂解液和細胞充分接觸,將所有液體轉入新的離心管中。冰上孵育20 min,讓細胞充分裂解(試劑使用量請參考附表1,冰上放置時間應根據細胞類型不同進行調整)。

?  對于懸浮細胞

(1) 將懸浮細胞2,500 g離心10 min,棄去培養基。

(2) 盡可能地棄去PBS(多余的液體將降低裂解液的濃度)。

(3) 加入適量 哺乳動物蛋白抽提試劑 (在抽提蛋白前2~3 min按照1:100加入 蛋白酶抑制劑混合液 ),每100 mg(約100 μl)細胞至少加入1 ml 哺乳動物蛋白抽提試劑 。如提取的樣本量較大,可先使用少量抽提試劑重懸細胞沉淀,然后加入剩余抽提試劑。在冰上用移液器吹打數下,使裂解液和細胞充分接觸,將所有液體轉入新的離心管中。冰上孵育20 min,讓細胞充分裂解。

3. 充分裂解后,10,000~14,000 g離心3~5 min,小心地將上清液(蛋白樣品)移入新的離心管中,即可進行后續的PAGE凝膠電泳、Western Blot和免疫沉淀等操作。得到的蛋白樣品可分裝并長期保存于-80℃。

 

注意事項

1. 本產品可有效裂解細胞培養板/皿培養的貼壁細胞(無需刮取)以及離心收集的懸浮細胞,較反復凍融或超聲法具有更高提取效率。但對于組織蛋白的抽提,建議使用組織蛋白抽提試劑盒(PC304);

2. 表1中所列的是貼壁細胞蛋白提取的最佳使用量,先收集細胞可以減少試劑用量從而獲得更高的蛋白濃度。也可以根據細胞數量估計抽提試劑的使用量。如2×106個Hela細胞約重20 mg,需要加入200 μl抽提試劑;

3. 通過本產品提取的蛋白,可通過BCA法進行蛋白定量分析;

4. 為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作;

5. 本產品僅限科研使用。

 

 

 

1 抽提試劑使用量推薦表 

細胞培養板類型或平皿類型

抽提試劑使用量

100 mm細胞培養皿

500~1,000 μl

60 mm細胞培養皿

250~500 μl

6孔細胞培養板

200~400 μl /孔

24孔細胞培養板

100~200 μl /孔

96孔細胞培養板

50~100 μl/孔

 

 

2 常見問題及解決辦法

問題

可能原因

解決方法

低提取

低蛋白表達量

優化轉染系統

試劑 使用量不夠

增加抽提試劑使用量

試劑無法溶解細胞膜

增加裂解時間或者加大晃動幅度

無法獲得膜蛋白

本產品更適合提取核漿蛋白

使用真核細胞膜蛋白抽提試劑盒

 


商家信息
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