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雅酶 細菌蛋白抽提試劑盒(您所在地區可能無法購買,詳情請咨詢:400-0588-030)

市場價:¥798.00

商城售價:798.00

所得積分:798

貨 號:PC301

品 牌:雅酶(EpiZyme)

包裝: 100次

單位:

供貨時間:現貨

數 量:
庫存9997件
  • 產品詳情

細菌蛋白抽提試劑盒

Bacterial Protein Extraction Kit

本產品常溫運輸其中 蛋白酶抑制劑混合液LysozymeDNaseⅠ 需冰袋運輸;保存于室溫其中 蛋白酶抑制劑混合液LysozymeDNaseⅠ 需保存于-20保質期12個月

 

貨號規格

PC301:  100次

 

產品內容

組分名稱

體積

細菌蛋白抽提試劑

100 ml

蛋白酶抑制劑混合液

1 ml

Lysozyme50 mg/ml

200 μl

DNaseⅠ1,000 U/ml

100 μl

  

產品特點

   溫和高效——使用溫和配方保證所提取蛋白保持生物學活性,在抽提試劑的基礎上添加了溶菌酶、DNaseⅠ可提高蛋白提取效率并減輕因DNA引起的粘稠現象;

   避免降解——帶有蛋白酶抑制劑混合物,可有效避免蛋白提取過程中蛋白的降解。

 

產品簡介

細菌蛋白抽提試劑使用溫和的非離子型去污劑,適用于大腸桿菌及昆蟲細胞表達的重組蛋白提取。提取過程中不需進行超聲破碎,有效避免了外源蛋白的污染。本產品可應用于從細菌裂解液中提取可溶性蛋白。細菌蛋白抽提試劑盒在抽提試劑的基礎上添加了溶菌酶、DNaseⅠ和蛋白酶抑制劑混合物,可提高蛋白提取效率并減輕因DNA引起的粘稠現象,有效避免蛋白降解。所提取的蛋白保持了生物學活性,可進行IP、Western Blot、蛋白純化等下游操作。

 

使用說明

?  細菌可溶性蛋白提取 

1. 5,000 g離心10 min,收集菌體; 

2. 可選步驟:每1 ml 細菌蛋白抽提試劑 中加入1 μl DNaseⅠ(1,000 U/ml)、 2 μl Lysozyme(50 mg/ml)和10 μl 蛋白酶抑制劑混合液 ,渦旋震蕩混勻; 

3. 按照每克菌體沉淀加入20 ml 細菌蛋白抽提試劑 的比例,向菌體沉淀中加入抽提液,充分渦旋或用移液器上下吹打直至菌體完全重懸; 

4. 重懸后,室溫孵育10~15 min(放置時間應根據細胞類型不同進行調整); 

5. 15,000 g離心5 min; 

6. 轉移上清至新的離心管中(上清中即為可溶性蛋白),進行蛋白定量及下游實驗。

注意如目的蛋白以包涵體形式存在,可使用包涵體蛋白溶解液(PC401)進行溶解或優化表達條件增加可溶性蛋白的表達。


?  昆蟲細胞蛋白提取 

                1. 低速離心收集細胞。每1 ml 細菌蛋白抽提試劑 中加入10 μl 蛋白酶抑制劑混合液 ;

2. 稱量細胞濕重,按10 ml/g的量加入 細菌蛋白抽提試劑 (已加入 蛋白酶抑制劑混合液 ); 

3. 重懸后,冰上孵育20 min(冰上放置時間應根據細胞類型不同進行調整); 

4. 15,000 g離心15 min,分離可溶性蛋白。

 

注意事項

1. 本品采用Tris緩沖系統,蛋白提取后的純化操作,請使用相同的緩沖系統;

2. 使用本產品獲得的蛋白裂解液,可用BCA或Bradford法進行蛋白定量;

3. 對于特殊的菌株,如果抽提效果不理想,可在抽提蛋白前冰凍樣品;

4. 根據具體情況,可在本產品中加入蛋白酶抑制劑、鹽、螯合劑、還原劑等。

 

 

 

常見問題

 

問題

可能原因

解決方法

目的蛋白不溶

目的蛋白表達為包涵體

①優化表達條件或使用包涵體蛋白溶解液

②在蛋白抽提試劑中加入Lysozyme和DNaseⅠ

加入Lysozyme 后目的蛋白仍沒有提取出來

①溫度過低

①將使用試劑恢復至室溫

②Lysozyme 活性降低或失活

②加入更多的Lysozyme或更換新的酶

提取物粘度高

DNase活性降低或失活

①加入更多的DNaseⅠ或更換新的 DNase

②將鎂離子的終濃度增加至2 mM

蛋白抽提后仍有大部分蛋 白存在于沉淀中

蛋白量過大

加入 Lysozyme 及 DNaseⅠ

蛋白抽提試劑有沉底析出

溫度過低

將蛋白抽提試劑恢復至室溫

 


商家信息
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