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雅酶 Bradford蛋白定量試劑盒(您所在地區可能無法購買,詳情請咨詢:400-0588-030)

市場價:¥1438.00

商城售價:1438.00

所得積分:1438

貨 號:ZJ102L

品 牌:雅酶(EpiZyme)

存儲條件:2~8℃(部分組分需-20℃)

供貨時間:現貨

數 量:
庫存9999件
  • 產品詳情

Bradford蛋白定量試劑盒

本產品冰袋運輸; BSA標準品-20℃保存,其他組分4℃保存,保質期12個月。

 

 貨號規格 

        ZJ102:  Bradford蛋白定量試劑盒     500次/微孔

        ZJ102L: Bradford蛋白定量試劑盒     2500次/微孔

 

 產品內容 

Catalog NO. 

ZJ102

ZJ102L

Size

 500 次/微孔 

 2500 次/微孔 

5×G250染色液

100 ml

500 ml

PBS稀釋液

  30 ml 150 ml

 BSA 標準品 (5 mg/ml) 

    1 ml      5 ml


 產品特點 

blob.png反應迅速,顏色產物1h內保持穩定。

blob.png較普通的考馬斯亮藍染色法具有更大的線性范圍和較小的變異系數。

blob.png靈敏度范圍為100~1500 μg/ml。

blob.png適用于多種緩沖液系統,干擾物質較少。

 

 產品簡介 

考馬斯亮藍G-250染料,在酸性溶液中與蛋白質結合,使染料的最大吸收峰的位置(Imax),由465nm變為595nm,在一定的濃度范圍內,測定的吸光度值A595與蛋白質濃度成正比。 Bradford法測定蛋白濃度不受絕大部分樣品中的化學物質的影響。樣品中巰基乙醇的濃度可高達1M ,二硫蘇糖醇的濃度可高達5mM。但受略高濃度的去垢劑影響。需確保SDS低于0.1%,Triton X-100低于0.1%,Tween 20,Tween60,Tween80低于0.06%。含去垢劑的樣品推薦使用雅酶生物生產的BCA蛋白定量試劑盒(ZJ101)。

 

 使用說明 

1. 稀釋BSA標準品:

?微孔酶標儀法:

完全融解蛋白標準品,取10μl,用與待測蛋白樣品相一致的稀釋液稀釋至250μl,使終濃度為0.2mg/ml。

?分光光度計法:

完全融解蛋白標準品,取100μl,用與待測蛋白樣品相一致的稀釋液稀釋至2.5ml,使終濃度為0.2mg/ml。

★Tip:為方便起見,也可以用0.9% NaCl或PBS稀釋標準品。

 

2. 配置1×G250染色液:

  a. 計算1×G250染色液總量:

    BCA工作液總量=(BSA標準品樣本個數+未知樣本個數)×復孔數×每個樣本G250染色液(1×)體積

   舉例:BSA標準品樣本個數為9個,未知樣本個數3個,復孔數3個。

   ?微孔酶標儀法:

    BCA工作液總量=(9個BSA標準品樣本+3個未知樣本)×3個復孔×200μl/每個樣本染色液體積=7.2ml

   ?分光光度計法:

   BCA工作液總量=(9個BSA標準品樣本+3個未知樣本)×3個復孔×5ml/每個樣本染色液體積=180ml

  b. 5×G250染色液使用前請顛倒3~5次混勻,根據計算出的1×G250染色液需要總量,取相應體積 5×G250染色液,加入雙蒸水,混勻成1×G250染色液。

       ★注意:1)由于加樣可能存在誤差,建議配制1×G250染色液時,多配制1~2個孔。

                     2)新配制的1×G250染色液室溫密封條件下可在4℃保存一周。

 

3. 定量檢測

     一、微孔酶標儀法

     1. 將稀釋后的標準品按0,1,2,4,6,8,12,16,20μl分別加到96孔板中,加用于稀釋標準品的溶液補足到20μl(為避免槍尖損失,可先補足稀釋液后加入標準品)。

     2. 將樣品適當稀釋(可以多作幾個梯度,如2倍、4倍、8倍稀釋),加20μl到96板的樣品孔中。由于移液器在取微量時的誤差,標準線左側的點可能不夠精確,所以須盡可能地使樣品點落在標準線1/2后。

     3. 各孔加入200μl稀釋后的1×G250染色液,室溫放置3~5min。

     4. 用酶標儀測定每個樣品及BSA標準品的A595,或560~610 nm之間的其它波長的吸光度,同時做好記錄。

     5. 繪制標準曲線,計算樣品中的蛋白濃度。

       注意數據處理時需要去除明顯錯誤的值。未知樣品濃度可以從標準曲線中查得, 實際濃度需要乘以樣品的稀釋倍數。如果是計算機繪制的曲線,可以從計算機給出的線性方程式計算出未知樣品的濃度。

 

     二、分光光度計法

    如果缺少酶標儀,可將樣本與試劑在離心管中混勻后加入比色皿用分光光度計進行比色。步驟如下:

     1. 取至少八支干凈的10ml離心管,標上記號。

     2. 按下表加入試劑

 離心管號 

 1   2   3   4   5   6   7(樣品管1)  8(樣品管2)

……

標準品 0μl

100μl

200μl 300μl 400μl  500μl 

 500μl適當稀釋的樣品1 

 500μl適當稀釋的樣品2 

 …… 

稀釋液(PBS)

 500μl 

 400μl 

 300μl 

 200μl 

 100μl 

0

0 0 0

1×G250

5ml

5ml

5ml

5ml

5ml

5ml

5ml

5ml

5ml


5. 反應3min后測OD值。為了實驗的準確性,可每間隔2min加一管染色液,每間隔2min測一管OD值。如下表。

 離心管號 

 1   2   3    4     5     6     7     8    …… 

 加染色劑(分鐘) 

0 2 4 6 8 10 12 14
……

測OD值(分鐘)

  3     5     7   9 11 13 15 17 ……


 注意事項  

1. 本產品可以采用酶標儀(微孔檢測法)或者分光光度計(試管檢測法)測定蛋白濃度。所測蛋白分子量必須大于3 kD。

2. 建議每次測定蛋白樣品時,都必須繪制標準曲線,以獲得準確數據。

3. BSA標準品的稀釋液需與待測樣品的稀釋液一致 (可用1×PBS或0.9%生理鹽水進行稀釋)。

4. 如待測樣品中含較多的干擾物質(具體見附表1),可采用BCA 蛋白定量試劑盒(ZJ101)或其他蛋白定量產品。

5. 操作中請佩戴手套。

6.本產品僅限科研使用。


 

干擾物質匯總

  化合物  

  耐受濃度  

  化合物  

  耐受濃度 

緩沖液

去垢劑和變性劑

乙酸鹽

0.6M

Brij35

干擾

甘氨酸

0.1M

CHAPS

1%

HEPES

0.1M

脫氧膽酸納

0.25%

MES

0.7M

NP-40

干擾

MOPS

0.2M

辛葡糖

2%

檸檬酸鈉

50mM

SDS

0.1%

PIPES

500mM

Triton X-100

0.1%

磷酸鈉 1M

Tween-20

干擾
乙酸鈉 0.6M

糖類

Tris

2M

蔗糖

1mM

鹽類

螯合劑

硫酸銨

1M

EDTA

100mM

NaCl

1M

EGTA

50mM

尿素

6M

DTT

1mM

極性化合物

其他

甘油

99%

NAD

1mM

還原劑

5%

尿素

3M

HCl

0.1M

DMSO

5%

NaOH

0.1M

  



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