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400-0588-030

雅酶 BCA蛋白定量試劑盒(您所在地區可能無法購買,詳情請咨詢:400-0588-030)

市場價:¥358.00

商城售價:358.00

所得積分:358

貨 號:ZJ101

品 牌:雅酶(EpiZyme)

存儲條件:2~8℃(部分組分需-20℃)

供貨時間:現貨

數 量:
庫存9854件
  • 產品詳情

BCA蛋白定量試劑盒

本產品冰袋運輸; BSA標準品-20℃保存,其他組分4℃保存,保質期12個月。

     

 貨號規格 

         ZJ101:   BCA蛋白定量試劑盒      500 次/微孔

        ZJ101L:  BCA蛋白定量試劑盒      2500 次/微孔

     

 產品內容 

    

Catalog NO. 

ZJ101

ZJ101L

Size

 500 次/微孔 

 2500 次/微孔 

試劑A

10ml

500 ml

試劑B

3 ml 15 ml

 BSA 標準品 (5 mg/ml) 

1 ml 5 ml


  產品特點 

blob.png準確,變異系數遠小于考馬斯亮藍染色法。

blob.png線性范圍寬,檢測靈敏,檢測范圍:20~5000 μg/ml。

blob.png與金屬離子、還原劑和螯合劑、去污劑兼容性較好。

     

 產品簡介 

    BCA蛋白定量法是目前廣泛使用的蛋白定量方法之一。本產品是基于BCA(Bicin-choninic Acid)法研制而成,實現了對蛋白質進行快速、穩定、靈敏的濃度測定。其原理是在堿性環境下蛋白質分子中的肽鏈結構能與Cu2+絡合生成絡合物,同時將Cu2+還原成Cu+。BCA試劑可敏感特異地與Cu+結合,形成穩定的有顏色的復合物。在562 nm處有高的光吸收值,顏色的深淺與蛋白質濃度成正比,可根據吸收值的大小來測定蛋白質的含量。本試劑盒含有牛血清白蛋白(BSA)溶液作為蛋白質標準品溶液,測定范圍為20~5000 μg/ml。

     

 使用說明 

1. 稀釋BSA標準品:

? 微孔酶標儀法:

完全融解蛋白標準品,取10 μl,用與待測蛋白樣品相一致的稀釋液稀釋至100 μl,使終濃度為0.5 mg/ml。

? 分光光度計法:

完全融解蛋白標準品,取100 μl,用與待測蛋白樣品相一致的稀釋液稀釋至1 ml,使終濃度為0.5 mg/ml。

★ 注意:為方便起見,也可以用0.9%生理鹽水或PBS緩沖液稀釋標準品。

 

2. 配置BCA工作液:

a. 計算BCA工作液總量:

BCA工作液總量=(BSA標準品樣本個數+待測樣本個數)×復孔數×每個樣本BCA工作液體積

舉例:BSA標準品樣本個數為9個,待測樣本個數3個,復孔數3個。

? 微孔酶標儀法:

BCA工作液總量=(9個BSA標準品樣本+3個待測樣本)×3個復孔×200 μl(每個樣本工作液體積)=7.2 ml

? 分光光度計法:

BCA工作液總量=(9個BSA標準品樣本+3個待測樣本)×3個復孔×2 ml(每個樣本工作液體積)=72 ml

b. 根據計算出的BCA工作液需要總量,將試劑A和試劑B按照50:1的體積比,配制BCA工作液,充分混勻。

★ 注意:1)由于加樣可能存在誤差,建議配制BCA工作液時,多配制1~2個孔。

               2)新配制的BCA工作液室溫密封條件下可穩定保存24小時。

 

3. 定量檢測

? 微孔酶標儀法(蛋白濃度檢測范圍:20~5000 μg/ml)

1. 將稀釋后的標準品按0,1,2,4,6,8,12,16,20 μl分別加到96孔板中,加用于稀釋標準品的溶液補足到20 μl(為避免槍尖損失,可先補足稀釋液后加入標準品)。

2. 將樣品適當稀釋(可以多作幾個梯度,如2倍、4倍、8倍稀釋),加20 μl到96孔板的樣品孔中。由于移液器在取微量時有誤差,標準線左側的點可能不夠精確,所以須盡可能地使樣品點落在標準曲線1/2后。

3. 各孔加入200 μl BCA工作液,充分混勻,蓋上96孔板蓋,37℃孵育30 min,冷卻至室溫,須在3~5 min內完成檢測。

注: 也可以室溫放置2 h,或60℃放置30 min。BCA法測定蛋白濃度時,吸光度會隨著時間的延長不斷加深。并且顯色反應會因溫度升高而加快。如果濃度較低,適合在較高溫度孵育,或延長孵育時間。

4. 用酶標儀測定每個樣品及BSA標準品的A562,或540~590 nm之間的其它波長的吸光度,同時做好記錄。

5. 繪制標準曲線,計算樣品中的蛋白濃度。

★ 注意:數據處理時需要去除明顯錯誤的值。待測樣品濃度可以從標準曲線中查得, 實際濃度需要乘以樣品的稀釋倍數。如果是計算機繪制的曲線,可以從計算機給出的線性方程式計算出待測樣品的濃度。

 

? 分光光度計法

如果缺少酶標儀,可將樣本與試劑在離心管中混勻后加入比色皿用分光光度計進行比色。步驟如下:

1. 取至少8支干凈的5 ml離心管,標上記號。

2. 按下表加入試劑

離心管號

1 2 3 4 5 6 7(樣品管1)

8(樣品管2)

……

稀釋后的標準品

0μl

40μl

80μl

120μl

160μl

200μl

200μl適當稀釋的樣品1

200μl適當稀釋的樣品2

……

稀釋液(PBS)

200μl

160μl

120μl

80μl

40μl

0μl

0μl

0μl

0μl

BCA工作液

2ml

2ml

2ml 2ml 2ml 2ml 2ml 2ml 2ml

3. 充分混勻,蓋上離心管蓋,37℃孵育30 min,冷卻至室溫,使用分光光度計后測OD值,須在3~5 min內完成檢測。


 注意事項 

1. 在低溫條件或長期保存出現沉淀時,可攪拌或37℃溫育使溶解;

2. 本產品可以采用酶標儀(微孔檢測法)或者分光光度計(試管檢測法)測定蛋白濃度;

3. 建議每次測定蛋白樣品時,都須繪制標準曲線,以獲得準確數據;

4. BSA標準品的稀釋液需與待測樣品的稀釋液一致(可用1×PBS或0.9%生理鹽水進行稀釋);

5. 完成37℃孵育30 min或室溫孵育2 h后,須在3~5 min內完成檢測,否則會影響蛋白定量的準確度。

6. 如待測樣品中含較多的干擾物質(具體見附表),可采用Bradford法蛋白定量試劑盒(ZJ102)或其它蛋白定量產品;

7. 為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作;

8. 本產品僅限科研使用。



干擾物質附表

  化合物  

  耐受濃度  

  化合物  

  耐受濃度  

緩沖液
去垢劑和變性劑
乙酸鹽

0.2M

Brij35

1%

甘氨酸

1M

CHAPS

1%

HEPES

0.1M

鹽酸胍

4M

MES

50mM

NP-40

1%

MOPS

50mM

辛葡糖

1%

檸檬酸鈉

<1mM

SDS

1%

PIPES

50mM

Triton X-100

1%

磷酸鈉 0.1M 糖類

乙酸鈉

0.2M pH5.5

葡萄糖

10mM

TES

50mM

蔗糖

1M

Tris 0.1M

螯合劑

鹽類

EDTA

10mM

硫酸銨 干擾 還原劑

NaCl

1M

β-巰基乙醇

50μM

尿素

3M

DTT

1mM

極性化合物 其他

DMSO

5%

HCl/NaOH

0.1M

甘油

10%

脂類

干擾

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