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雅酶PC101 RIPA裂解液(強)(您所在地區可能無法購買,詳情請咨詢:400-0588-030)

市場價:¥168.00

商城售價:168.00

所得積分:168

貨 號:PC101

品 牌:雅酶(EpiZyme)

存儲條件:2~8℃

供貨時間:現貨

  • 產品詳情

RIPA 裂解液

RIPA Lysis Buffer 

本產品常溫運輸;保存于4℃,保質期12個月。

 

貨號規格

PC101     RIPA 裂解液(高強度)      100mL

PC102     RIPA 裂解液(中強度)      100mL

PC103     RIPA 裂解液(弱強度)      100mL

PC104     RIPA 裂解液(強中弱套裝)  50mL×3

 

產品簡介

RIPA裂解液RIPA的本意是Radio Immunoprecipitation Assay是一種傳統的細胞組織快速裂解液主要用于從動物細胞和動物組織中提取可溶性蛋白其裂解得到的蛋白樣品可以用于常規的Western BlotIP及Elisa等實驗RIPA裂解液的配方有很多種根據其裂解強度大致可以分為強弱三類用RIPA裂解液裂解得到的蛋白樣品可以使用 BCA蛋白定量試劑盒 (貨號ZJ101或ZJ102)測定蛋白濃度由于含有較高濃度的去垢劑不宜使用Bradford法測定由本裂解液裂解得到的樣品的蛋白濃度

 

使用說明

1. 取適當量的裂解液每1×106個細胞需要約50~100μL或每20mg組織需要約150~250μL在使用前數分鐘內將 蛋白酶抑制劑 按1:100V/V加入其中 蛋白酶抑制劑 需另行購買,貨號:GRF101

   注:如所需提取的為磷酸化蛋白還需在RIPA裂解液中按1:100V/V加入 磷酸酶抑制劑 貨號GRF102

2. 樣本裂解需在冰上操作): 

?  對于貼壁細胞

(1) 棄去培養基用PBS或生理鹽水無血清培養液洗一遍如果血清中的蛋白沒有干擾可以不洗

(2) 盡可能地棄去PBS多余的液體將降低裂解液的濃度

(3) 按照每1×106個細胞需要約50~100μL的比例加入RIPA裂解液比如6孔板每孔細胞量大約需加入150~250μL裂解液用移液器吹打數下使裂解液和細胞充分接觸通常裂解液接觸細胞1~2s后細胞就會被裂解

(4) 將所有液體轉入新的離心管中 

?  對于懸浮細胞

(1) 將細胞轉移至離心管中離心收集細胞棄去培養基

(2) 用PBS或生理鹽水無血清培養液洗一遍如果血清中的蛋白沒有干擾可以不洗

(3) 盡可能的棄去PBS多余的液體將降低裂解液的濃度

(4) 按照每1×106個細胞需要約50~100μL的比例加入RIPA裂解液比如6孔板每孔細胞量大約需加入150~250μL裂解液用移液器吹打數下使裂解液和細胞充分接觸充分裂解后應沒有明顯的細胞沉淀如果細胞量較多必須分裝成5×105~1×106個細胞/然后再裂解

?  對于組織樣品

(1) 把組織剪切成細小的碎片

(2) 按照每20mg組織加入150~250μL裂解液的比例加入裂解液;(如果裂解不充分可以適當添加更多的裂解液如果需要高濃度的蛋白樣品可以適當減少裂解液的用量。)

(3) 用玻璃勻漿器勻漿直至充分裂解如果組織樣品本身非常細小可以適當剪切后直接加入裂解液裂解通過強烈渦旋振蕩使樣品裂解充分直接裂解的優點是比較方便不必使用勻漿器缺點是不如使用勻漿器裂解得充分

3. 充分裂解后10,000~14,000g離心3~5min小心地將上清液蛋白樣品移入新的離心管中即可進行后續的PAGE凝膠電泳Western Blot和免疫沉淀等操作得到的蛋白樣品可分裝并長期保存于-80℃

 

注意事項

1. 4℃保存時,裂解液中的SDS易析出,使用前請在37℃水浴使其完全溶解,待恢復到室溫即可使用;

2. 裂解樣品的所有步驟都需在冰上或4℃進行;

3. RIPA裂解液的裂解產物中經常會出現一小團透明膠狀物,屬正常現象。該透明膠狀物為基因組DNA等形成的復合物。如不檢測和基因組DNA緊密結合的蛋白,可以直接離心取上清用于后續實驗;如果需要檢測和基因組結合特別緊密的蛋白,則可以通過超聲處理打碎打散該透明膠狀物,隨后離心取上清即可用于后續實驗。但如果檢測一些常見的轉錄因子,例如NF-kappaB、p53等時,通常不必進行超聲處理,就可以檢測到這些轉錄因子;

4. 為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作;

5. 本產品僅限科研使用。


產品選擇參考

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商家信息
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