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雅酶 RIPA裂解液(強)(您所在地區可能無法購買,詳情請咨詢:400-0588-030)

市場價:¥198.00

商城售價:198.00

所得積分:198

貨 號:PC101

品 牌:雅酶(EpiZyme)

存儲條件:2~8℃

供貨時間:現貨

  • 產品詳情

RIPA 裂解液

RIPA Lysis Buffer

本產品溫運輸;保存于4保質期12個月

 

貨號規格

PC101   RIPA 裂解液(高強度)         100ml

PC102   RIPA 裂解液(中強度)         100ml

PC103   RIPA 裂解液(弱強度)         100ml

PC104   RIPA 裂解液(強中弱套裝)  50ml×3

 

產品簡介

RIPA 裂解液(RIPA Lysis Buffer)是一種傳統的細胞組織快速裂解液。RIPA 裂解液裂解得到的蛋白樣品可以用于常規的 Western Blot、IP 等實驗。 RIPA的本意是Radio Immunoprecipitation Assay。RIPA 裂解液的配方有很多種,根據其裂解液的強度大致可以分為強、中、弱三類。用RIPA 裂解液裂解得到的蛋白樣品,可以用雅酶生物(EpiZyme)生產的BCA 蛋白濃度測定試劑盒(ZJ101)測定蛋白濃度。由于含有較高濃度的去垢劑,不能用Bradford法測定由本裂解液裂解得到的樣品的蛋白濃度。

 

使用說明

1取適當量的裂解液,在使用前數分鐘內將 蛋白酶抑制劑 按1:100(V/V)加入其中(蛋白酶抑制劑需另行購買,貨號:GRF101);

2. 樣本裂解:

?  對于貼壁細胞

(1) 棄去培養基,用PBS(或生理鹽水、無血清培養液)洗一遍(如果血清中的蛋白沒有干擾,可以不洗);

(2) 盡可能地棄去PBS(多余的液體將降低裂解液的濃度);

(3) 按照每5×106細胞需要約200~500 μl的比例加入RIPA裂解液,比如6孔板每孔大約需加入150~250 μl裂解液。用移液器吹打數下,使裂解液和細胞充分接觸。通常裂解液接觸細胞1~2 s后,細胞就會被裂解;

(4) 將所有液體轉入新的離心管中。

?  對于懸浮細胞

(1) 將細胞轉移至離心管中,離心收集細胞,棄去培養基;

(2) 用PBS(或生理鹽水、無血清培養液)洗一遍(如果血清中的蛋白沒有干擾,可以不洗);

(3) 盡可能的棄去PBS(多余的液體將降低裂解液的濃度);

(4) 按照每5×106細胞需要約200~500 μl的比例加入RIPA裂解液,比如6孔板每孔細胞量大約需加入150~250 μl裂解液。用移液器吹打數下,使裂解液和細胞充分接觸。充分裂解后應沒有明顯的細胞沉淀。如果細胞量較多,必須分裝成 5×105~1×106個細胞/管,然后再裂解。

?  對于組織樣品

(1) 把組織剪切成細小的碎片;

(2) 按照每20 mg組織加入150~250 μl裂解液的比例加入裂解液;(如果裂解不充分可以適當添加更多的裂解液,如果需要高濃度的蛋白樣品,可以適當減少裂解液的用量。)

(3) 用玻璃勻漿器勻漿,直至充分裂解。如果組織樣品本身非常細小,可以適當剪切后直接加入裂解液裂解,通過強烈渦旋振蕩使樣品裂解充分。直接裂解的優點是比較方便,不必使用勻漿器,缺點是不如使用勻漿器裂解得充分。

 

3. 充分裂解后,10000~14000 g離心3~5 min,小心地將上清液(蛋白樣品)移入新的離心管中,即可進行后續的PAGE凝膠電泳、Western Blot和免疫沉淀等操作。得到的蛋白樣品可分裝并長期保存于-80℃。

 

注意事項

1. 裂解液中SDS 4℃保存易沉淀析出,使用前應該37℃水浴重新溶解完全后回復到室溫使用;

2. 裂解樣品的所有步驟都需在冰上或4℃進行;

3. RIPA裂解液的裂解產物中經常會出現一小團透明膠狀物,屬正常現象。該透明膠狀物為含有基因組DNA等的復合物。在不檢測和基因組DNA結合特別緊密的蛋白的情況下,可以直接離心取上清用于后續實驗;如果需要檢測和基因組結合特別緊密的蛋白,則可以通過超聲處理打碎打散該透明膠狀物,隨后離心取上清用于后續實驗。如果檢測一些常見的轉錄因子,例如 NF-kappaB、p53等時,通常不必進行超聲處理,就可以檢測到這些轉錄因子;

4. 為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作;

5. 本產品僅限科研使用。

 

產品選擇參考

 

目錄號

PC101

PC102

PC103

產品名稱

RIPA 裂解液(強)

RIPA 裂解液(中)

RIPA 裂解液(弱)

有效裂解成分

1%Triton X-100

1% sodium deoxycholate

0.1% SDS

1% NP-40

0.5% sodium deoxycholate

0.1% SDS

1% NP-40

0.25% sodium deoxycholate

裂解強度

溫和

膜蛋白提取

很好

較好

一般

胞漿蛋白提取

很好

很好

很好

核蛋白提取

很好

較好

較好

主要用途

WBIP

WBIP

WBIPCO-IP

 



商家信息
愛生物自營

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郵箱 :[email protected]

電話 :400-0588-030

地址 :上海市閔行區立躍路2995號

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