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雅酶YY101L TRIzyme提取試劑 RNA提取試劑 Trizol(您所在地區可能無法購買,詳情請咨詢:400-0588-030)

市場價:¥1498.00

商城售價:1498.00

所得積分:1498

貨 號:YY101L

品 牌:雅酶(EpiZyme)

存儲條件:4℃

供貨時間:現貨

數 量:
庫存9988件
  • 產品詳情

RNA提取試劑

Total RNA Isolation Reagent

本產品常溫運輸;避光保存4~25℃,保質期24個月。

 

貨號規格

YY101    100mL

YY101L   100mL×5

 

產品特點

色彩鮮艷——便于區分水相和有機相的分界面,方便吸取上清

高性價比——產品質量絲毫不遜色于進口同類產品,而價格僅為其一半左右

 

產品簡介

雅酶生物的總RNA提取試劑適用于從細胞和組織中快速分離RNA/DNA/蛋白質。整個實驗過程操作簡單省時,所提取的RNA純度高,可用于Northern Blot、PolyA RNA富集、體外翻譯、RNase保護分析、反轉錄等下游實驗。本品含有苯酚,如不慎接觸皮膚,應立即用大量流水沖洗

 

使用說明

    請確保您所使用的離心管、移液器吸頭以及其它器皿未被RNase污染。金屬和玻璃制品可在200℃烘烤2h以上。塑料制品和水可用0.01%的DEPC水浸泡過夜,高壓滅菌。所有溶液應使用DEPC處理后的水配制。

 

分離RNA

1. 裂解勻漿:

A.組織樣品 將組織用液氮在研缽中速凍后,碾磨成極細的粉末,期間應不斷添加液氮,保持組織樣品處于冷凍狀態。按50~100mg組織加入1mLRNA提取試劑(樣品體積不應超過試劑體積的10%),此時總RNA提取試劑由于低溫會凝固。繼續研磨,盡量將凝固的試劑在其融化前磨成粉末,以使總RNA提取試劑和組織粉末盡快混合充分。幾分鐘后,隨著研缽的溫度上升,總RNA提取試劑會慢慢融化。充分研磨勻漿樣品后,將裂解液轉移到一個1.5mL的離心管內。如使用的組織為容易勻漿的樣本,如大腦、肝臟等,可直接用玻璃勻漿器勻漿。

B.貼壁培養的細胞 吸去培養板中的培養基,按每10cm2相當于一個3.5cm直徑的培養皿或6孔板的一個孔的面積培養面積直接加入1mL總RNA提取試劑。晃動培養板,使總RNA提取試劑反復流過培養細胞的表面,待所有貼壁的細胞裂解后,將裂解液轉移到一個1.5mL的離心管內。

C.懸浮培養的細胞 離心收集細胞(無需洗滌細胞,洗滌細胞的過程極有可能會使RNA降解),按每5~10×106個動物、植物、酵母細胞或1×107個細菌細胞加入1mL總RNA提取試劑,反復吹打,使細胞分散裂解。一些酵母細胞或細菌細胞可能需要用勻漿儀處理。

2. 裂解后的勻漿液于室溫放置5min,使核酸和蛋白質復合體完全分離;

3. 可選:如樣品中含有較多組織碎片或多糖等不溶物質(常見于抽提植物組織RNA時),可于4℃ 12,000g離心10min,取上清液進行下一步操作;

4. 按每使用1mL總RNA提取試劑加入0.2mL氯仿,劇烈震蕩混勻15s,室溫放置3~5min

5. 于4℃ 12000g離心15min。樣品將分為三層:下層為綠色有機相,上層為無色水相,中間層為白色的DNA和蛋白質;

6. 吸取上層水相,轉移到一個干凈的離心管中。加入等體積異丙醇,室溫放置10min沉淀RNA。小分子RNA(如microRNA等),在異丙醇沉淀過程中會大量丟失,因此如希望回收microRNA等小分子RNA,可改用2.5倍體積乙醇,于-20℃沉淀30min以上。如需同時純化DNA和蛋白質,請保留有機相和中間層;

7. 于4℃ 12,000g離心10min,收集沉淀。離心后,管底和管側可見白色或半透明狀RNA沉淀。棄上清;

8. 用1mL 75%乙醇洗滌RNA沉淀。于4℃ 12000g離心10min,棄上清;

9. 將離心管放回離心機輕甩幾秒,使殘留在管壁的乙醇溶液集中到管底,用移液器吸頭小心吸去殘余的乙醇溶液;

10. 打開離心管管蓋,室溫晾干RNA沉淀。一般3~5min即可。加入適量無RNase的水溶解沉淀。

 

分離DNA

1. 在上述 分離RNA 第6步的有機相和中間層中,按每使用1mL總RNA提取試劑加入0.3mL無水乙醇,混勻,室溫放置3min,于4℃ 12,000g離心5 min

2. 將上清轉移到一個干凈的離心管內,以備后續分離蛋白。DNA沉淀用含10%乙醇的0.1M檸檬酸鈉溶液充分洗滌。按每使用1mL總RNA提取試劑加入1mL洗滌液,室溫放置30min,于4℃ 12,000g離心5min,棄上清,重復一次;

3. 用75%乙醇洗滌沉淀。按每使用1mL總RNA提取試劑加入1.5mL 75%乙醇,室溫放置10~20min,期間不時顛倒混勻。于4℃ 12000g離心5min,棄上清;

4. 室溫晾干DNA沉淀。用8mM的NaOH溶液溶解DNA;

5. 將DNA溶液pH調整至7.5。按每1mL 8mM NaOH溶液加入160μL 0.1M的HEPES溶液。

 

分離蛋白質

1. 取沉淀DNA后的上清,按每使用1mL總RNA提取試劑加入1.5mL異丙醇,室溫放置10min,于4℃ 12,000g離心5min,棄上清;

2. 用含0.3M鹽酸胍的95%乙醇洗滌蛋白質沉淀。按每使用1mL總RNA提取試劑加入2mL洗滌液,室溫放置20min,于4℃ 7500g離心5min,棄上清。重復兩次后,用2mL無水乙醇再洗一次;

3. 晾干沉淀,用1% SDS溶液溶解蛋白沉淀,必要時可于50℃加熱助溶。離心,棄不溶物。上清即可用于Western Blot分析。

 

注意事項

1. 為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。本品含有苯酚,如不慎接觸皮膚,應立即用大量流水沖洗;

2. 本產品僅限科研使用。


商家信息
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